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一文帶您詳細(xì)了解方波電穿孔儀

更新時(shí)間:2022-09-20      點(diǎn)擊次數(shù):399
  方波電穿孔儀用于細(xì)菌、酵母和其他眾多微生物的電擊轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化時(shí),高壓電脈沖作用于懸浮在小體積高阻介質(zhì)中的樣品。本系統(tǒng)由一個(gè)脈沖發(fā)生器(pulse generator)模塊、一個(gè)電擊腔(shocking chamber)和一個(gè)裝有電極的電擊杯(cuvette)組成。樣本放置于電擊杯的電極之間。Micropulser模塊包含一個(gè)電容器,將電容器充電至高電壓,然后模塊將電容器中的電流放電到試管中的樣品中。
 
  方波電穿孔儀的電容放電電路產(chǎn)生具有指數(shù)衰減波形的電脈沖。當(dāng)電容器放電至樣品時(shí),跨越電極的電壓迅速上升至電壓(or峰值電壓,peak voltage/·也稱為初始電壓,Vo),并隨時(shí)間(t)減小,如下式:
 
  其中T=R·C,為時(shí)間常數(shù),是脈沖長(zhǎng)度的簡(jiǎn)便表達(dá)式。
 
  R為電路電阻,單位為ohms(歐姆)。
 
  C為電容,單位為microfarad(微法拉)。
 
  根據(jù)方程1,T是電壓下降至峰值電壓1/e(~37%)的時(shí)間。MicroPulser的內(nèi)部電路被設(shè)計(jì)以使E.co、釀酒酵母及其他許多微生物可以得到電穿孔,轉(zhuǎn)化效率發(fā)生在大約5ms的時(shí)間常數(shù)內(nèi)。這些電穿孔條件是通過(guò)使用10微法拉電容器和將600歐姆電阻與樣品池并聯(lián)以及將30歐姆電阻與樣品池串聯(lián)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
 
  方波電穿孔儀除時(shí)間常數(shù)外,電場(chǎng)強(qiáng)度是另一個(gè)決定轉(zhuǎn)化效率的重要參數(shù)。電場(chǎng)強(qiáng)度E,是施加于電極間的電壓,其中,V為施加的電壓,d為電極間的距離,單位為cm。電場(chǎng)強(qiáng)度和細(xì)胞的尺寸(size)決定了橫貫每個(gè)細(xì)胞的電壓降,正是電壓降可能是電穿孔中電壓效應(yīng)的重要表現(xiàn)。30歐姆串聯(lián)電阻的目的是在發(fā)生電弧的情況下保護(hù)設(shè)備電路。在正常操作條件下,當(dāng)樣本在高電阻介質(zhì)中,電阻不會(huì)影響施加在樣本上的電壓。但是,當(dāng)樣本的電阻較低時(shí),電阻將降低施加在樣品上的電壓。