雙波懸浮細(xì)胞電穿孔儀是一種用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染的儀器。在分子生物學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)研究中,需要對細(xì)胞進(jìn)行外源性DNA、RNA的導(dǎo)入,可以快速地實(shí)現(xiàn)外源性DNA、RNA等分子的導(dǎo)入,為科學(xué)家們提供了較為簡單細(xì)胞轉(zhuǎn)染手段。當(dāng)然,在實(shí)驗(yàn)過程中要注意安全規(guī)范,同時積極進(jìn)行技術(shù)優(yōu)化與設(shè)備維護(hù),以取得更加準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,以達(dá)到基因敲除、表達(dá)等功能,這就需要采用各種工具來完成細(xì)胞膜的穿透和細(xì)胞轉(zhuǎn)染。依靠高壓脈沖電場作用于細(xì)胞時產(chǎn)生的短暫通道效應(yīng)將載體DNA或siRNA等物質(zhì)導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)。
雙波懸浮細(xì)胞電穿孔儀操作步驟:
1.準(zhǔn)備穿孔室,并注入上述包含DNA或RNA的溶液。
2.在系統(tǒng)開啟前對通道線路進(jìn)行檢查,確保線路連接穩(wěn)定且指示燈正常運(yùn)行。
3.將含有目標(biāo)細(xì)胞的懸浮液加入離子體。
4.使用裝置進(jìn)行預(yù)設(shè)處理?xiàng)l件的優(yōu)化(如選擇不同的脈沖電場強(qiáng)度、持續(xù)時間、寬度、頻率等參數(shù)),根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇,并記錄下設(shè)定參數(shù)。
5.將準(zhǔn)備好的細(xì)胞懸浮液放入穿孔室中,在設(shè)定好的條件下進(jìn)行穿孔操作。
6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后清洗設(shè)備及穿孔室。
7.將處理后的細(xì)胞用適當(dāng)培養(yǎng)基保存并觀察。
雙波懸浮細(xì)胞電穿孔儀注意事項(xiàng):
·進(jìn)行轉(zhuǎn)染時,務(wù)必使用無菌實(shí)驗(yàn)方式,以避免微生物對細(xì)胞的影響。
·在實(shí)驗(yàn)過程中要注意細(xì)胞的狀態(tài)和數(shù)量,并盡可能避免機(jī)械振動等情況的干擾。
·應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要逐步優(yōu)化電場條件,但同時注意不要超出細(xì)胞能承受的范圍,避免重大損傷甚至死亡。
·在使用中應(yīng)定期進(jìn)行設(shè)備維護(hù)與保養(yǎng),以保障其性能及數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。